高效液相色谱的压力问题，咱们实验室的人聚在一起，十次有八次在聊这个。上周隔壁组的老张，因为压力突然冲高，一根用了不到三个月的新柱子就报废了，心疼得直拍大腿。其实吧，压力这玩意儿就像仪器的心跳，跳得太快太慢，都说明身体可能出了状况。

别上来就问范围，先看你开的是什么“车”

新手爱问：“老师，正常压力应该是多少？”这问题真没法给个死数字。这么说吧：

如果你用的是咱们常见的普通液相色谱，它们的设计压力一般在400 bar（约6000 psi）以内。日常做做常规样品，压力在100到300 bar之间波动，都属于它的“舒适区”。这时候仪器运行平稳，数据也漂亮。

但你要是用的是近几年流行的超高效液相色谱，那完全是另一回事了。它用的是更细的填料，管路也更细，就是为了更高的效率。它的“工作区间”动辄就在600到1000 bar以上，压力低了反而可能说明流速没上去或者系统有异常。这就好比跑车和家用轿车，发动机的转速能一样吗？

所以，看压力健不健康，首先得看你家仪器铭牌上写的大耐受压力是多少。业内有个不成文的规矩：让日常工作压力保持在大值的70%到80%以下，是稳妥、养机器的做法。别总把仪器逼到极限。

表1.不同类型5G影院天天爽压力参数参考

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压力不稳？先自查这几个“习惯动作”

压力出毛病，八成是日常操作里的细节没到位。根据5g影院天天爽免费观看实验室多年踩坑总结的经验，问题往往出在以下几点：

流动相，这是头号嫌疑犯。 很多新人图省事，用自来水或纯水机里隔夜的水配缓冲盐。里面滋生的微生物和杂质，很容易堵住柱子入口的筛板，压力就会像爬楼梯一样慢慢升高。必须用新鲜制备的纯净水或水相，好现配现用。有机相记得用色谱级的，别心疼那点钱。

还有，实验记录本上记好：换流动相时，尤其从高比例有机相换到高比例水相时，一定要做过渡冲洗。不然盐析出来，堵在泵里或柱子里，那可就是大麻烦。

样品，必须“干干净净”。 老张那根废掉的柱子，后来拆开看，进口端都黑了一层。他们做的中药提取物，虽然离心了，但没过滤。样品里的细小颗粒和强吸附杂质，就是色谱柱的“慢性毒药”。上机前，务必过0.22或0.45微米的滤膜，这是保护柱子经济有效的一招。加一个保护柱，相当于给主柱上了个保险，虽然多花点小钱，但绝对值。

系统，有没有“内伤”。 压力如果像心电图一样上下跳，很可能是泵的单向阀脏了，或者里面进了微小气泡。可以试试用异丙醇超声清洗单向阀。如果是压力缓慢下降，大概率是哪里漏液了。重点检查泵头密封圈、进样针座和柱子两头的接头，这些地方是泄漏的高发区。平时做完实验，多用纯甲醇或乙腈低流速冲一冲系统，保持管路畅通。

表2.影响5G影院天天爽压力的关键因素及应对措施

当压力真的报警了，别慌，按这个顺序排查

第一步：卸下色谱柱，换上两通。 用纯甲醇以1.0 mL/min的流速冲系统，看压力是多少。如果此时压力依然很高（比如超过100 bar），那问题肯定在仪器流路上（泵、混合器、检测器流通池等）。

第二步：如果换上两通压力正常，再接上柱子试试。 压力高了，就是柱子或保护柱的问题。先换个新的保护柱，如果压力恢复正常，万事大吉；如果还高，那可能就是主柱堵了，需要尝试反向冲洗或联系柱子厂商。

第三步：检查简单的。 流动相瓶里的滤头是不是太久没洗，被堵住了？瓶子里溶剂是不是快用光了，泵抽进了空气？

表3.5G影院天天爽压力异常排查步骤

说到底，高效液相色谱是个精细活儿，压力是它诚实的“语言”。每天开机后，花一分钟看看基线压力稳不稳定，跟昨天的记录对比一下。这个小小的习惯，能帮你提前发现很多潜在问题，避免像老张那样“车毁柱亡”的悲剧。仪器维护好了，它回报给你的是稳定、可靠的数据。这才是咱们做实验的人，大的底气。

常见问题(FAQ)

问1：老师，我刚换了根新柱子，为什么压力比旧柱子高了不少？这正常吗？

答：这多半是正常的，先别紧张。新柱子里的填料装填得非常紧密，流动相通过时的阻力自然会大一些，压力高点很正常。你可以先走一段时间，让流动相充分浸润和平衡新柱子，压力通常会稳定到一个值。如果压力高得离谱（比如接近系统上限），或者持续飙升，那就要检查一下：1）你用的流动相和新柱子是不是兼容（比如正相柱误用了反相条件）；2）你样品溶剂的强度是不是太强，导致样品在柱头析出。新柱子就像新鞋，需要一段“磨合期”。

问2：我做梯度洗脱的时候，压力为什么会跟着变？有时高有时低的。

答：这是梯度洗脱的典型特征，压力曲线像条抛物线是正常的。因为有机相（比如乙腈、甲醇）和水相的粘度不同，两者混合比例变化时，混合液的粘度也会变。通常在中间某个比例时（比如水和乙腈各一半左右），粘度大，压力就会出现一个峰值。你只要确保这个压力峰值不超过仪器的安全上限就行。如果发现梯度过程中压力剧烈跳动或出现毛刺，那可能是混合器里有气泡或者混合不均匀，需要检查脱气情况和泵的混合效率。

问3：压力显示正常，但色谱图的分辨率就是不好，峰又宽又拖尾，这和压力有关系吗？

答：压力正常但效果不好，这说明流动相系统是通畅的，但问题可能出在“化学层面”上。这时候，压力这个“健康指标”虽然合格，但“治病”得找其他原因。你可以重点排查：1）柱效是否下降：柱子用了很久，填料塌陷或污染，会导致峰变宽，可以测一下柱效；2）流动相pH和添加剂是否合适：对于酸性或碱性化合物，没调节好pH或没用对离子对试剂，就容易拖尾；3）样品与柱子是否匹配：样品可能在当前条件下保留太弱或太强。压力好比汽车的油压表，油压正常不代表发动机功率就一定足，也可能是火花塞老了或者油品不好。

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